一般是电穿孔法，适用于极难转染的细胞，如原代细胞，转染效率高，但转染后细胞死亡率也很高。

选用转染试剂与核酸结合，通过内吞作用进入细胞。一般转染试剂有以下三种：

病毒载体，转染效率高，但整合到基因组的风险大，基因长度也受限，比较适合构建稳转的细胞株。

影响细胞转染效率的因素较多，主要包括细胞生长状况、传代次数、转染试剂与质粒的比例和孵育时间、质粒大小等，其中转染试剂与质粒的比例尤为关键。

对于不同的细胞类型，转染试剂与质粒的最佳比例也不同。由于不同细胞表面结构、细胞膜、核膜等结构存在较大差异，同种转染试剂在不同细胞的转染效率也不尽相同。

因此，对于较难转染的细胞如原代细胞、神经细胞，为提高转染效率，必须对转染试剂与质粒的比例做进一步优化。

对于X-tremeGENE™系列的转染试剂，我们建议转染试剂与质粒的比例按照1:1、2:1、3:1、4:1（ul：ugDNA）四个比例进行测试，选出最优的比例，对于大多数细胞类型，3:1的比例是最合适的。

对于大多数细胞类型来说，建议在细胞密度70%-90%之间进行转染，过多或者过少都可能降低转染效率。

转染后最佳的孵育时间为18-72小时，对于大多数的细胞类型和质粒来说，最佳的孵育时间是24-48小时。

培养基中一些组分如聚阴离子会影响转染，保证培养基中无这样的组分。

稀释后DNA的量最低为100ul，过低的量会显著降低转染效率。

对于大多数细胞类型来说，建议在细胞密度70%-90%之间进行转染，过多或者过少都可能降低转染效率。

对于常规细胞来说，无血清培养基的营养成分不够，会降低细胞的存活率，虽然roche的转染试剂可以在无血清培养基中进行转染，但考虑到细胞需要血清营养成分的供给，应使用正常培养基或者减血清培养基。

应该将复合物以一滴滴缓慢加入的方式加入细胞培养基中，然后轻轻地前后和左右晃动，使复合物均匀分布。

质粒应该保证是高纯度无污染的，可以在提完质粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，这样可以起到除菌的效果。