1、将培养基上清从培养瓶中转移到50ml锥形管中；

2、旋紧Steriflip^®组件（货号:SCGP00525，0.22µm，PES膜）至样品管顶部，打开样品管末端；

3、倒置组件并固定在基座或架子上；

4、将调节真空源连接到Steriflip^®装置侧面的真空端口上。打开真空使溶液通过膜进入空管；

5、拆下Steriflip^®装置并盖上样品。将过滤后的样品保存在4°C或进行囊泡富集。

本离心超滤方案基于使用AU-15超滤管（10kDa MWCO，#UFC901024） 处理15mL样品。如果要使用不同的体积或超滤管规格（AU-0.5，AU -2或AU-4mL），请参阅相应的Amicon^®Ultra超滤管使用说明书。

2、移去超滤装置底部未过滤的PBS，抽取收集管里的滤液。

• 对于AU-2、AU-4和AU-15，可通过移液器去除滤液。
• 对于AU-0.5，可1000 x g 反转离心2分钟去除滤液，移除收集管中PBS或更换新的收集管。

1、像AU-15超滤管中加入15ml样品，盖上盖子；

2、 4,000xg离心30分钟；

备注：终产品体积通常大约500µL（30倍浓度），但根据样品的性质、流速和离心时间可能会有所不同。有关样品体积和终体积的估计，请参阅对应Amicon^®Ultra超滤管使用说明书。

3、从离心机上取下超滤装置，弃除收集管里的液体；

4、往过滤装置中加入14mL PBS，移液器轻轻吸吐多次。4,000xg离心30分钟；
5、从过滤装置中回收浓缩样品；
• 对于AU-2、AU-4和AU-15，可用移液器吸取样品，并多次冲洗膜侧壁（每侧3-4次）以确保完全回收。
• 对于AU-0.5，将过滤器倒扣在干净的离心管中。在2000xg下离心1分钟，将样品转移到试管（反向旋转）。

6、细胞外囊泡样品准备好进行分析。